Um microscópio de fluorescência é um tipo de microscópio óptico que usa uma fonte de luz de alta intensidade para iluminar a amostra e excitar fluorocromos na amostra. A iluminação da amostra geralmente é feita com uma fonte de luz que emite luz ultravioleta. Eles são amplamente utilizados nas áreas biológicas, médicas e industriais.
Como funciona um microscópio de fluorescência?
Um microscópio de fluorescência usa uma lâmpada de mercúrio ou xenônio para produzir luz ultravioleta. A luz entra no microscópio e atinge um espelho dicróico – um espelho que reflete uma faixa de comprimentos de onda e permite a passagem de outra faixa. O espelho dicróico reflete a luz ultravioleta até a amostra. Algumas amostras apresentam fluorescência natural sob luz ultravioleta porque contêm substâncias fluorescentes como a clorofila. Se a amostra a ser visualizada não apresentar fluorescência natural, ela poderá ser corada com corantes fluorescentes chamados fluorocromos.
Em que consiste um microscópio de fluorescência?
1. Fonte de luz
As fontes de luz mais comuns são mercúrio, xenônio e LEDs. Mercúrio fornece a melhor qualidade de luz para microscópio de fluorescência. Os LEDs estão se tornando mais populares porque são mais baratos que outras fontes e consomem menos energia.
| Lâmpada de Mercúrio | Lâmpada de xenônio | LIDERADO | |
| Comprimento de onda da luz emitida | 350-370nm | 400 nm ~ 450 nm | 400-700nm |
| Tempo de vida (hora) | 200-300 | 400-600 | 10.000 |
| Vantagem | 1. Luz de alta intensidade, as fontes de luz mais comuns. 2. Emite ultravioleta forte e azul-violeta para excitar todos os tipos de fluoróforos. 3. Imagens brilhantes e coloridas. | 1. A intensidade espectral é estável. 2. Forte intensidade espectral no infravermelho e no infravermelho médio. | 1. Fácil de substituir. 2. Não há necessidade de aquecimento. 3. Pode ser ligado e desligado instantaneamente. 4. Controle a intensidade da fonte de luz. |
| Desvantagem | 1. Uma vida curta. 2. Longo tempo de aquecimento. | 1. É necessária uma caixa de alimentação CC especial de baixa tensão para o excesso de calor. 2. Mais caro que a lâmpada de mercúrio | 1. A luz UV é mais fraca que a lâmpada de mercúrio. 2. Cada comprimento de onda de luz requer um LED separado devido às larguras de banda estreitas que emitem. |
Acessório Fluorescente de Mercúrio
Acessório fluorescente LED
2. Filtro de excitação
O filtro de excitação é essencial para o funcionamento de um microscópio de fluorescência. Ele passa a luz de comprimento de onda mais curto, que o corante fluorescente poderia absorver. Além disso, bloqueia outras fontes de luz excitante.
Filtro de excitação (B,G,U,V)
3. Espelho Dicróico
O espelho dicróico é um tipo de filtro óptico que reflete a luz em determinados comprimentos de onda enquanto transmite outros. É usado em microscópios de fluorescência para separar os comprimentos de onda de excitação e emissão.
4. Filtro de Emissão
O filtro de emissão passa apenas os comprimentos de onda emitidos pelo fluoróforo e bloqueia toda a luz indesejada fora desta banda – especialmente os comprimentos de onda de excitação.
5. Corantes fluorescentes
Os corantes fluorescentes são compostos orgânicos que possuem uma propriedade de fluorescência, pela qual podem formar uma imagem fluorescente emitindo luz verde visível de alto contraste após serem excitados pela luz ultravioleta altamente iluminadora. Os corantes fluorescentes comumente usados são; DAPI (49,6-diamidino-2-fenilindol), laranja de acridina, auramina-rodamina, Alexa Fluors ou DyLight 488.
Quantos tipos de microscópios de fluorescência?
1. Microscópio de epifluorescência vertical:
É o tipo mais comum de microscópio de fluorescência. A excitação do fluoróforo e a detecção da fluorescência são feitas através do mesmo caminho de luz (ou seja, através da objetiva). A maioria dos microscópios de fluorescência, especialmente aqueles usados nas ciências da vida, são do tipo epifluorescência.
Microscópio biológico fluorescente de pesquisa BS-2081F
2. Microscópio de fluorescência confocal:
Microscópio de fluorescência confocal: Este tipo de microscópio de fluorescência combina varredura a laser com iluminação fluorescente para produzir uma imagem. Ele pode ser usado em uma ampla gama de aplicações, como estudo de células e tecidos, detecção de proteínas e outras substâncias dentro de células e medição da espessura de materiais.
Microscópio biológico fluorescente de pesquisa BS-2081F
3. Microscópio de fluorescência invertida
A fonte de luz e o condensador deste tipo de microscópio estão localizados na parte superior, voltados para baixo. O ângulo de iluminação deve ser de 90 graus em relação à superfície da amostra que está sendo examinada.
Microscópio Fluorescente Invertido BS-2095F
Quais são as vantagens e desvantagens dos microscópios de fluorescência?
Vantagens:
- Permite a observação de células em organismos vivos sem danificá-las
- Fornece imagens de alta resolução com cores precisas
- Permite o estudo de processos vivos nas células
- Ser usado para identificar diferentes tipos de moléculas dentro das células, como proteínas ou ácidos nucléicos.
Desvantagens:
-Permite apenas a observação de estruturas específicas dentro de uma célula marcada com o corante fluorescente.
-O fotobranqueamento devido à excitação eletrônica durante o processo de fluorescência pode afetar moléculas reativas dos corantes fluorescentes. Como resultado, os corantes reativos podem perder a sua propriedade química de intensidade de emissão de fluorescência.
-As células ficam suscetíveis ao efeito fototóxico após coloração com corantes fluorescentes, pois as moléculas de fluoróforo absorvem os fótons de alta energia da luz de comprimento de onda curto.
Quais são as aplicações de um microscópio de fluorescência?
Os microscópios de fluorescência são amplamente utilizados em vários campos de pesquisa e aplicação, incluindo bioquímica, biologia celular, microbiologia, imunologia e medicina.
1. No campo da biologia, o microscópio de fluorescência permite a identificação precisa e detalhada de componentes e atividades celulares e submicroscópicas com a ajuda da marcação com corante fluorescente.
2. Na área médica, o microscópio de fluorescência pode usar reagentes fluorescentes para detectar a presença e distribuição de bactérias e vírus, ou para auxiliar na marcação de alvos cirúrgicos para facilitar a cirurgia.
3. No campo da mineralogia, o microscópio de fluorescência é frequentemente usado para estudar substâncias com propriedades de fluorescência espontânea, como asfalto, petróleo, carvão, óxido de grafeno e outros minerais.
4. Na ciência dos materiais, o microscópio de fluorescência pode ser usado na indústria têxtil ou na indústria de papel para analisar materiais à base de fibras.
Horário da postagem: 14 de março de 2023